一、摘要

遗传转化是基因功能研究中获取植物材料的必要技术手段。根癌农杆菌介导的遗传转化基本原理为根癌农杆菌对植物受伤后释放的化学物质产生趋化反应，向植物受伤组织集中。经共培养后，植物受伤部位的化学诱导物透过农杆菌的细胞膜使Ti质粒上的Vir基因活化。Vir基因产物使Ti质粒上的T-DNA进入植物细胞，并整合到植物核基因组中，使外源基因在植物细胞中得到表达。烟草是最早用于遗传转化的模式植物，本视频使用烟草叶盘法，对烟草叶片进行剪切造成伤口，使得根癌农杆菌可以侵染烟草叶片并将外源基因整合到烟草基因组中。

二、关键词

烟草；叶盘法；遗传转化；根癌农杆菌；转基因；组织培养

三、实验样品信息，试剂、耗材或仪器

1. 样品信息

植物材料：苗龄为2个月的烟草无菌苗。

2. 试剂和耗材

（1）农杆菌重悬液：MS培养基粉末（不含琼脂和蔗糖）(青岛高科园海博生物技术有限公司, Cat No./ID: HB8469-5) 4.74 g/L，加入30 g/L蔗糖，调节pH为5.8左右。在悬浮农杆菌前加入乙酰丁香酮（北京索莱宝科技有限公司，Cat No./ID: A8110-1g），终浓度为100 μM。

（2）共培养基：MS培养基粉末 (青岛高科园海博生物技术有限公司, Cat No./ID: HB8469) 41.74 g/L，加热溶解于蒸馏水中，116℃高压灭菌30 min（下同）。倒板前加入6-BA（北京索莱宝科技有限公司，Cat No./ID: A8170-1g）终浓度为1 μg/mL，NAA（北京索莱宝科技有限公司，Cat No./ID: N8010-5g）终浓度为0.1 μg/mL。

（3）S1（分化）培养基：MS培养基粉末41.74 g/L，倒板前加入6-BA终浓度为1 μg/mL， NAA终浓度为0.1 μg/mL，头孢/(噻孢)霉素（北京索莱宝科技有限公司，Cat No./ID: C8240-10g）终浓度为500 μg/mL，相应转基因载体抗性的抗生素。

（4）S2培养基：MS培养基粉末41.74 g/L，6-BA终浓度为0.5 μg/mL，NAA终浓度为0.05 μg/mL，头孢/(噻孢)霉素终浓度为500 μg/mL，相应转基因载体抗性的抗生素。

（5）S3培养基：MS培养基粉末41.74 g/L，6-BA终浓度为0.2 μg/mL，NAA终浓度为0.02 μg/mL，头孢/(噻孢)霉素终浓度为500 μg/mL，相应转基因载体抗性的抗生素。

（6）生根培养基：MS培养基粉末41.74 g/L，不加6-BA，NAA终浓度为0.02 μg/mL，头孢/(噻孢)霉素终浓度为500 μg/mL，相应转基因载体抗性的抗生素。

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